产品目录

本试剂盒适用于从各种动物骨组织样品中提取总蛋白。可提取各种密质骨与松质骨、软骨组织样品。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该蛋白提取液能充分裂解骨细胞，成骨细胞、破骨细胞，其中含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。等下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化组成使其可以抑制几乎所有重要蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液制备：
  根据样本数量，按每500μL冷的骨组织蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂和2μL蛋白稳定剂，混匀后置2～8℃备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样本数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步骤配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取新鲜骨组织样品，在4℃，pH7.4的PBS缓冲液或生理盐水中充分浸泡。换新鲜生理盐水/PBS再次充分浸泡，然后用纯水清洗，去除血液，红细胞。
  
• 将骨组织剪碎，称重后放入装有液氮的研钵中，将骨组织磨成粉末，保持液氮不能完全挥发。
  注：
  ● 不方便液氮研磨的话也可直接加入提取液后研磨。
  ● 当组织块较小，不好研磨时，可以用铝箔纸包裹好，放入少量液氮，快速敲击，注意控制好力量，减量避免弄破铝箔纸，反复多次。
  ● 较软的小骨组织可直接加入提取液后用小型匀浆器/匀浆机进行匀浆。
  
• 将骨组织粉末加入离心管中，按每200mg骨组织加入500μL蛋白提取液。
  
• 混匀后在4℃条件下振荡30分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在80w-100w，5s超声/5s间隔条件下冰浴超声20次。
  注：
  ● 如无超声条件此步可不做。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到骨组织总蛋白。
  
• 上述蛋白提取物直接用于下游实验或分装后于-80℃冰箱保存备用。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 提取速度慢？
  为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
  
• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续震荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。